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小鼠急性肺损伤模型制备及评估指南 駧:Mus musculus(小鼠) 基础信息 来源:脂多糖(LPS)介导的急性肺损伤 模式动物品系:Balb/c小鼠,SPF级,周龄4~6周,体重20g~22g 实验分组:随机分组,包括对照组、模型组、阳性药物组和受试药物组(三个剂量梯度组),每组15只小鼠 实验周期:24小时 建模方法 麻醉小鼠,待呼吸较慢时开始操作 小鼠行气管插管,稍按压胸部后注入0.5ml空气阔胸 采用气管滴注方法,经气管滴注LPS溶液(溶于生理盐水,给药剂量10mg/kg),药物需靠小鼠自主呼吸而吸入 将小鼠直立,垂直旋转小鼠,使药物在肺内均匀分布,然后将老鼠放在加热垫上 待老鼠清醒后正常饲养 正常对照组的小鼠做同样的操作,但向气管内注射等体积的生理盐水 注意事项 麻醉状态要恰到好处,小鼠呼吸较慢,离开麻醉机后2分钟内不会挣扎 药物最好由小鼠自主吸入,若未吸入可用0.5ml空气送入药物 模型评价 肺损伤后的大体观察:肺损伤后有肉眼可见肺部大面积出血渗出,可以直观的反映肺损伤程度 肺的湿/干重比:肺的湿/干重比是反应肺水肿的直接指标,也是反应肺损伤严重程度的敏感指标。建模后,大量液体渗出至肺泡和肺间质,导致肺的重量增大,而肺的干重则不受影响。处死大鼠、剪断气管后取全肺,称湿重,然后将肺置于65℃恒温箱中干燥,24小时后取出称干重,计算肺湿/干重比值 组织病理学:取左肺4%多聚甲醛固定,然后将肺组织常规脱水,石蜡包埋,切片(厚度为5),HE染色。HE染色肺组织学评价可以直观的反应肺损伤的程度,ALI组织病理学主要表现为肺泡中性粒细胞及红细胞的渗出,肺泡壁透明膜的形成。HE染色后可在低倍镜下观察到整个左肺组织的炎症细胞浸润、水肿以及损伤,评估肺部损伤分布情况;而高倍镜下则可以对肺泡结构进行辨认,对肺损伤程度进行评估和评分 评分方法:取6个视野进行出血及水肿评分 0分:没有损伤 1分:<25%的损伤面积 2分:25%~50%的损伤面积 3分:50%~75%的损伤面积 4分:>75%的损伤面积 左肺叶气管解剖,行支气管插管,预冷的(4度)无菌生理盐水1ml进行支气管肺泡灌洗3次,共3ml,回收支气管肺泡灌洗液(BALF)至无菌离心管中,1500r/min离心10分钟,收集上清液,-80℃保存,使用ELISA试剂盒检测肺泡灌洗液中TNF-IL-6和IL-1퉧𛆨因子的含量。
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